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紫外可見分光光度計測亞硝酸鹽
发布时间:2019-03-15 点击次数:1041次

紫外可見分光光度計測亞硝酸鹽

酶将肉制品中的硝酸盐还原成亚硝酸盐,再用紫外可見分光光度計法测定其中的硝酸盐和亚硝酸盐含量。

1.制備樣品溶液

用合適的儀器將實驗樣品混合均質。注意樣品溫度不能超過25℃。如果使用絞肉機,至少要使樣品從機器中絞兩遍。稱取(精確到10mg)10g混合均勻的樣品,移入廣口錐形瓶中,加入50ml水,均質30~60s。用50mL熱水清洗均勻漿器的軸,連洗液一並移入錐形瓶中,再加入0.2ml溴百裏酚藍溶液,用氫氧化鈉溶液滴定提取液,直到溶液顔色從黃色變爲淺綠色/灰綠色,然後在沸水浴中加熱15min。在加熱過程中,反複震蕩,用勻漿機將其中的固體顆粒全部溶解。

(在了解掌握此方法時,爲了在調解PH時熟悉顔色的變化,可先滴定少量樣品提取液,並使用指示劑,然後測量其PH。生肉産品的PH不能超過8.5,若超過,其溶液就不能通過滴加卡瑞試劑後過濾來使之純化。如果是熟肉産品,這種危險則不易發生,PH可允許達到9.5.如果使用PH計,則將PH調到8~8.5。)

檢測熟香腸,調節PH時,顔色變爲淺綠色(瞬間)爲檢測終點。另一方面,如果檢測生香腸提取物,這一顔色變化通常比較緩慢,且顔色變爲灰綠色。如果檢測帶血的熟香腸,觀察到的顔色與之相似。即使提取液中含有很多的天然色素,通過幾次練習這一顔色變化也能被輕易地辨別出來,盡管提取液的顔色會附加在指示劑的顔色之上,使實際顔色與理論推測的經常不同。

检测生香肠的提取液,经过一定时间 后可能观察到相反的颜色变化。这种情况下,滴加氢氧化钠来调节PH。

冷卻至室溫,將錐形瓶中一定量的提取液移入200ml容量瓶中,加入1號卡瑞溶液各4mL,每次加完後振蕩容量瓶。用水稀釋至刻度,混合均勻,並用濾紙過濾,棄去前20mL濾液。剩余澄清的濾液用于檢測樣品溶液。

亞硝酸鹽含量標准曲線

将作为空白的2.0mL水,2.0mL各浓度亚硝酸钠标准溶液分别与1.0mL水、3.0mL显色剂混合置于试管中,摇匀并在室温下避光保存。1Ml水和3ML显色剂,混匀,室温下避光静置。30Min 后,紫外可見分光光度計參比池裏放入水,用紫外可見分光光度計測量樣品540nm處的吸光度。4種亞硝酸鈉標准溶液的吸光值對相應的亞硝酸鹽根離子含量(200mL溶液中)做曲線,含量以"亞硝酸根離子質量”表示。

硝酸鹽含量標准曲線

在试管中加入0.2ml NADPH溶液,再加入2.0mL作为空白的水或分别加入2.0mL各浓度硝酸钾标准溶液,以及0.8mL硝酸盐还原酶缓冲液,充分混合均匀,在室温下静置1h。再加入3.0mL显色剂混合物,摇匀,室温下避光储存。30Min后,紫外可見分光光度計參比池裏放入水用紫外可見分光光度計在波長爲540nm處檢測其吸光度。用4種硝酸鉀標准溶液的吸光值對響應的總硝酸鹽、亞硝酸鹽的含量(200mL溶液中)做曲線,含量以“亞硝酸根離子質量(mg)表示”

亞硝酸鹽含量的測定

比色皿中加入2mL的樣品溶液,放入紫外可見分光光度計自动四联样品池。1Ml水和3ML显色剂,混匀,室温下避光静置。30Min 后,紫外可見分光光度計參比池裏放入水,測量樣品540nm處的吸光度。

 


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